免疫组化---信息收集

免疫组化，基因检测两种检测手段，在指导用药方面论坛里说法不一。免疫组化可以用于病理分型，也可以用于指导靶向药用药。

以下是本论坛或者网络的一些相关信息的收集。信息准确与否，自作鉴别。个人能力有限，仅作参考。

免疫组化表达意义    老马贴子
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求助：免疫组化和基因检测的区别是什么？指导靶向治疗，两个都要做吗？
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免疫组化选靶向药的问题
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病理科免疫组化在临床上的应用及其意义
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免疫组化技术是以免疫学的抗原抗体反应为其理论基础发展起来的一门方法学，在生物学领域尤其是

在医学的基础和临床研究中发挥重要的作用，对疾病尤其是肿瘤的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究

提供了强有力的手段。免疫组化技术是20世纪70年代初Sterb  Berger在酶标法的基础上发明的，80年

代在外国开始应用于临床研究和诊断，90年代初在我国逐渐开始应用于疑难病例的诊断和鉴别诊断。

随着新技术的不断发展，抗体种类从研发开始的十几种发展到目前数百种抗体应用于临床科研的各个

领域，我国在临床病理诊断上可用抗体293种。由于抗体较昂贵，所以各院根据活检量和病种不同选择

不同的抗体，这些抗体对大部分疑难病例的诊断起到重要的辅助作用。对病人的预后及指导治疗具有

重要的意义。
一、目前常用的抗体分四大类

1．上皮性标记物：CK high（AE3）， CK low ，CK-pan，CK19，CK7， CK20，EMA，CEA，-CA15-3，

SCLC , E－Caldeherin, CA125, Tg(甲状腺球蛋白) ,TTF-1 AFP。这些抗体阳性，表明肿瘤组织起源

于上皮组织，如果是恶性肿瘤，就是癌.
2．间叶组织标记物：SMA ，Desmin，Vimentin， Lysozyme， AACT , CD68   MyoD1，CD117， 这些

抗体阳性，表明肿瘤组织起源于间叶组织，如果是恶性肿瘤，就是肉瘤。
3.神经及神经内分泌标记物：CgA ，Synaptophysin，NSE，S-100：NF（神经纤维丝蛋白），GFAP，

CD99，CD56。
4.淋巴细胞标志物：
T cell标记物：CD3, CD45RO , CD43, CD5, CD8,CD4,ALK,GranmB , CD56 。
B cell标记物：CD-20 ，CD79a ，CD23， CD10 ， Kappa ，Lambda   CD21   CD38，CyclinD1，Bcl

-2。                                          
其它：LCA，CD15，CD30，MPO ，CD34，TdT，这些抗体用于淋巴瘤33个亚型的诊断和鉴别诊断。

二、 目前开展的系列检查和意义

1.乳腺癌五项（ER、PR、C-erbB-2(Her-2)、Ki-67、P53）ER、PR阳性，90％的病人对三苯氧胺类药物

疗效好。 C-erbB-2阳性（2+－3+）可服用抗Her-2基因药物。如果ER和PR均阴性，C－erbB－2强阳性

预示预后不好。
      
Ki67是细胞生长指数，代表细胞周期中除G0期以外的细胞生长速度。Ki-67值越高表明肿瘤细胞生长越

快，预后越不好。P53是广谱致癌基因，在许多肿瘤中都有表达，表达值越高预后越不好。据报道，国

际上目前有抗P53基因阳性的药物用于治疗肿瘤。

2.垂体腺瘤功能六项检查

LH（ 促黄体生成素），FSH（卵泡刺激素），ACTH（促肾上腺皮质激素 ），TSH（ 促甲状腺素），

PRL（泌乳素 ）GH（生长激素 ） 。根据某一种抗体阳性表达进行术后药物治疗。

3.恶性肿瘤的Ki-67和P53常规检查

目前的研究表明，大部肿瘤的复发、转移取决于Ki-67值和P53值，而与肿瘤的组织的分型关系不是十

分密切，如中分化腺癌，如果Ki-67和P53值超过50％，预后不佳，相反，如肿瘤的组织分型为低分化

腺癌，而Ki-67和P53值较低，预后也会较中分化或高分化癌的预后稍好。（是判断分化标准吗？低分化预后差）

4.GIST（胃肠道间质瘤）和EGIST（胃肠道外间质瘤）的诊断

GIST是90年代新发现的肿瘤，过去均诊断为平滑肌瘤或平滑肌肉瘤，现在经过一组免疫组化可将其诊

断，GIST的生物学形为一般无良性，因为小于50px的GIST偶而也有转移。其良恶性程度取决于肿瘤的

大小和核分裂像，国际确定GIST侵袭行为危险性的推荐方案如下：

危险程度 大小 核分裂数
很低 <50px <5/50HPF
低 2-125px <5/50HPF
中等 <125px5-250px 6-10/50HPF<5/50HPF
高 >125px>250px不计 >5/50HPF不计>10/50HPF

GIST的免疫组化结果为：CD117（+）、CD34（±）、S-100（±）Actin（±）、Desmin(-)。CD117阳性可

用格林卫治疗，且效果较好。

5.淋巴瘤的WHO分型
   
淋巴瘤WHO最新分型有33个亚型，每个亚型的预后和治疗方案均有所不同，而淋巴瘤的诊断和分型又是

极其困难的，是病理中的难中之难，“没有一个病理学家不在淋巴瘤上犯错误”这是我国一位病理名家

说得话，美国的淋巴瘤误诊率为33％，所以诊断淋巴瘤的免疫组化方案必须“双份套餐式”的，即每一

种组织的标记物必须用2种以上的抗体，如我们诊断B细胞淋巴瘤，必须有CD20和CD79a阳性正面证实，

同时还需要用CD3阴性反面来证实，因此诊断淋巴瘤需8-10种左右的抗体，才能准确地反应出淋巴瘤各

种亚型的信息。

（相关阅读：世界卫生组织消化道神经内分泌肿瘤分类(2010)）
三、免疫组化在肿瘤靶向治疗中的作用

1.目前肿瘤的靶向治疗已经引起人们的重视，许多靶向药物逐渐应用于临床治疗。第一个靶向治疗的

药物是治疗淋巴瘤的抗CD20嵌和性抗体是Rituxan。抗肿瘤单抗偶联物Zevalin（Ibritumomab

tiuxetan）用于Rituxan治疗无效或复发的低度恶性B细胞瘤。

2.抗血管内皮生长因子（VEGF）重组人源化单抗Avastin(Bevacizumab)有抗肿瘤内新生血管形成作用

，最近被批准为治疗转移性结直肠癌的一线药物。

3.抗表皮生长因子受体（EGFR）嵌合性单抗Erbitux（Cetuximab）用于治疗标准化疗无效，且EGFR阳

性的转移性结直肠癌。
4.抗C－kit(CD117)的药物格林卫对治疗大部分GIST有明显的疗效。

5．Herceptin是一种人源化单抗用于治疗Her-2高表达的乳腺癌和其它实体瘤如卵巢癌、前列腺癌和非

小细胞肺癌。
因为有了这些靶向药物的治疗，因此在病理上检测这些靶基因的表达对于指导临床用药非常有意义。

预留

图片摘自http://www.yuaigongwu.com/forum. ... id=23867&page=6

摘自http://www.yuaigongwu.com/forum. ... d=23867&page=25

摘自http://www.yuaigongwu.com/forum. ... d=23867&page=26
目前主要的检测方法有三类：PCR，fish，IHC

1、检测egfr基因突变的就是pCR方法 ，其结果就是突变或者野生；
egfr还有检测扩增的，结果是阳性用的fish方法 ；
还有用IHC免疫组化检测egfr表达，结果就是+++或者++或者+，+++就是高表达，根据易瑞沙，特罗凯的临床数据，其效果与突变结果直接相关
与扩增相关小一些，与免疫组化结果关系不大

2、alk可以用PCR,fish,ihc方法看
fish方法是标准
而现在alk也批准了ihc方法，但国内医院那种1，200的免疫组化查alk是不准的等于白做

3、cmet突变的极少，一般易，特耐药都是cmet扩增，国外的cmet药临床有用fish方法查扩增的，也有用ihc查高表达的

多谢收集信息

非常有用，谢谢楼主

感谢楼主，多来学习

http://www.ccmtv.cn/video/1079/10712.html
二、分子靶点的检测方法及质量控制
（一）检测技术
目前，EGFR 基因突变的检测技术主要有直接测序法和扩增阻遏突变系统（ARMS）。ALK 临床常用检测方法为荧光原位杂交（ FISH）、免疫组织化学（IHC）和反转录酶一聚合酶链锁反应（RT-PCR）。FDA 在批准克唑替尼上市的同时，批准 FISH 方法用于 EMLA-ALK 融合基因的诊断，并且引入了伴随诊断的概念。
中国医学科学院肿瘤医院比较了上述 3 种检测方法的一致性，与金标准 FISH 相比，IHC 检测敏感度和特异度分别为 97.7% 和 96.6%，是检测 ALK 融合基因的可靠方法。2013 年 9 月 12 日，CFDA 批准 VENTANA ALK IHC 用于检测 ALK 蛋白表达以筛选适合服用克唑替尼的肺癌患者。
（二）检测样本的质量控制
在临床分子标志物检测中，首先需要获得患者的肿瘤标本，其质量决定了检测结果的准确性。常见的临床标本类型包括：手术切除标本、活检标本（CT 引导下细针穿刺、纤维支气管镜活检）、细胞学标本（恶性胸水、心包积液、支气管镜刷片）、痰液和血标本等。
目前，肿瘤组织是 EGFR 和 ALK 等分子靶点检测的最适标本。为确保检测结果的准确性，传统的组织病理学非常重要，应尽早地选择新鲜且肿瘤细胞丰富的标本进行分子标志物检测，才能够有效地保证肿瘤个体化分子靶向治疗的顺利进行。近年来，通过血液中循环肿瘤 DNA 检测 EGFR 突变取得了显著进展，在无法获取肿瘤组织样本的情况下，可以通过血液中循环肿瘤 DNA 检测 EGFR 突变。

这篇文章有一些新的观点值得参考
http://mp.weixin.qq.com/s?__biz= ... 13b4deca7a07c72e#rd

【1】8000: AZD9291可作为EGFR突变阳性晚期NSCLC的一线治疗方案

AZD9291是一种口服EGFR TK抑制剂，对EGFR突变（EGFRm）和T790M耐药性突变的NSCLC具有抗肿瘤活性。I期研究（AURA）纳入EGFRm晚期非小细胞肺癌，初始接受AZD9291（80mg/d或160mg/d）的患者。

60例患者纳入研究（80mg和160mg均为30例）。原发灶19号外显子缺失37%，L858R 40%，其他EGFR敏感性突变为3%，T790M 8%。客观缓解率为70%：80mg，60%；160mg，80%，中位无进展生存期（PFS）尚未达到。疾病控制率为97%：80mg，93%；160mg，100%。

总体而言，3和6个月的PFS率分别为93%和87%。AZD9291有望作为EGFRm晚期NSCLC的一线治疗方案。

【2】8001：rociletinib对血浆基因分型T790M突变阳性NSCLC疗效分析

Rociletinib是EGFR突变的口服抑制剂，包括T790M耐药性突变。T790M阳性患者予以500-1000mg/bid治疗有明显活性。研究1阶段，EGFR突变的非小细胞肺癌患者予以≥1种 EGFR抑制剂治疗，ECOG PS 0-1。包含脑转移瘤患者。第2阶段，肿瘤原发灶基因分型T790M阳性。

345例患者纳入研究，先前治疗的中位数为3（45%≥2次先前TKI治疗）。无论何种基因分型方法，T790M阳性患者的RECIST客观缓解率（ORR）为～48%。T790M阴性患者ORR为33-36%。

血浆T790M阳性患者17例，然而组织分型阴性（9）或失败（8），5/17出现治疗反应。16例患者组织T790M阳性，然而血浆基因分型阴性，6/16出现治疗反应。3/8例患者两种方法检测均为阴性出现治疗反应。多数T790M阴性反应者均在给予EGFR TKI后立即予以rociletinib（10/12组织和血浆10/10）治疗。一系列血浆数据表明T790M的水平随时间的推移降低。治疗相关AEs：高血糖（40%），腹泻（28%），恶心（23%），乏力（21%），食欲下降（17%）。

Rociletinib与持久反应相关，可以很好的耐受点与EGFR突变T790M阳性的NSCLC。三分之一T790M阴性的患者也存在反应，无法用疗效解释。血浆基因分型可能是患者选择的一个补充方法。

【3】8002：以铂类为基础的晚期鳞状细胞癌（SCC）患者化疗后二线阿法替尼VS厄洛替尼比较研究

晚期SCC以铂类为基础的化疗后出现进展患者的选择有限。EGFR和ErbB受体过表达及其下游信号通路失调阳性SCC病理学表现。初步分析LL8试验肺SCC患者2线A（一个不可逆的ErbB家族阻滞剂）vs E（可逆的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂））显示A组无进展生存期（PFS）明显延长。OS和PFS更新在这里报告。

IIIB/IV期疾病患者随机1：1获得A（40mg/d）或E（150mg/d），直至疾病进展。主要研究终点：PFS；关键的次要终点：OS。其他终点：客观反应（ORR），疾病控制（DCR），患者报告的结果和安全性。

A（N=398）相比E（N=397）可使OS显著获益，降低19%的死亡风险。A组的PFS（中位数2.6 vs 1.9 mos），ORR（5.5 vs 2.8%）和DCR（50.5 vs 39.5%）均较 E好。A相比E改善患者的总体健康状况/生存质量（35.7 vs28.3%），咳嗽（43.4 vs35.2%）和呼吸困难（51.3 vs44.1%）。不良事件（AE），G≥3 AEs：A vs E分别为57.1 vs 57.5%，A组药物相关性G3/4腹泻和G3口腔炎发生率较高，E组G3级皮疹/痤疮发病率较高（5.9 vs10.4%）。

SCC患者二线治疗方案相比E显著改善OS，PFS和DCR也明显较好。A组显著优于E组。

【4】8003：Cabozantinib（C）、厄洛替尼（E）或联合（E+C）作为EGFR野生型NSCLC患者二线或三线治疗方案的比较研究

Cabozantinib（C）是小分子多受体酪氨酸激酶抑制剂，包括MET，VEGFR2和RET的。MET参与肿瘤分化和VEGFR2血管生成。

该随机II期临床研究的主要目的是比较Cabozantinib（C）、厄洛替尼（E）或联合（E+C）后患者的无进展生存期（PFS）。次要研究目标包括总生存期（OS），RECIST 1.1应答和CTCAE V4毒性。患者的纳入标准为先前接受治疗（1-2疗程）的转移性野生型表皮生长因子受体的非鳞非小细胞肺癌。IHC检测原发灶MET。口服每日给药：E-150mg；C-60mg；E+C-150mgE，40mgC。E或C治疗进展后患者可选择E+C。

125例患者纳入研究，其中115例患者符合治疗标准（E，N=39；C，N=39；E+C，N=37）。相比E（中位数1.9m），C（3.9m）和E+C（4.1m）组患者PFS显著改善。同样，相比E（中位数4.0m），C和E+C组OS显著改善。C组3～4级治疗相关的高血压和黏膜炎较高，E+C组3-4级腹泻较高。C和E+C组总体最差的毒性反应亦显著升高。初步分析88例患者的MET IHC结果，85%为阳性（MET4抗体1-3+膜或胞浆染色）。MET状态和PFS无关。

C和C + E较单纯E显著改善EGFR（wt）NSCLC患者的PFS。Cabozantinib为基础的治疗方案有望作进一步研究。